Detección de Betalactamasas de espectro extendido en Enterobacteriaceae en un Centro de Salud de Maracaibo, Venezuela / Detection of Extended-Spectrum ß-lactamase-producing Enterobacteriaceae in a Healthcare Center from Maracaibo city, Venezuela

La alta incidencia de las enfermedades infecciosas y el aumento de la resistencia a los antibióticos se han convertido en la actualidad en un problema de salud pública, siendo las enterobacterias productoras de Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE) un ejemplo de este fenómeno. En el presente estudio se determinó la producción de BLEE en aislados clínicos de la familia Enterobacteriaceae procedentes de una institución de salud de la ciudad de Maracaibo, durante el periodo septiembre de 2014 a febrero de 2015. Para la detección de BLEE se utilizó como método preliminar el de Kirby-Baüer, siguiendo los lineamientos del CLSI; adicionalmente se utilizó como prueba confirmatoria fenotípica el método de sinergia del doble disco y como prueba confirmatoria genotípica la detección de los genes blaCTX-M, blaTEM y blaSHV mediante PCR. Se analizaron 55 enterobacterias productoras de BLEE, distribuidas de la siguiente manera: Escherichia coli 56,36%, Klebsiella pneumoniae 21,82%, Enterobacter cloacae 7,27%, Proteus mirabilis y Serratia marcescens 5,45% para cada especie, por último, Salmonella spp. y Morganella morganii 1,82% respectivamente. En cuanto al tipo de BLEE detectado mediante PCR, se observó que el 83,63% de los aislados presentó el tipo TEM, seguido de CTX-M (23,63%) y SHV (21,81%), mientras que el 27,27% de los aislados produjo dos o tres BLEE de manera simultánea. Los resultados de este estudio confirman la alta diseminación de este mecanismo de resistencia entre las enterobacterias productoras de infecciones en nuestras instituciones públicas de salud, por lo que deben aplicarse medidas de control que permitan controlar y disminuir su incidencia.

The high incidence of the infectious diseases and the antimicrobial resistance arise represent a public health threat today. The extended-spectrum ß-lactamase (ESBL)-producing Enterobacteriaceae are an example of this phenomenon. We determined the ESBL-production in Enterobacteriaceae isolates from a Healthcare Center in Maracaibo, during September 2014 to February 2015. The Kirby-Baüer method was perform to preliminary phenotypic detection of ESBL, according to CLSI guidelines. ESBL-production was confirmed by a double-disk synergy test according to the CLSI standards. To genotypic confirmation, the genes blaCTX-M, blaTEM and blaSHV were amplified by PCR. Fifty-five (n=55) strains were analyzed distributed in Escherichia coli (56.36 %), Klebsiella pneumoniae (21.82 %), Enterobacter cloacae (7.27 %), Proteus mirabilis and Serratia marcescens (5.45 % each one), Salmonella spp. and Morganella morganii (1.82 % each one). The major encoded ESBL was the blaTEM gene (83.63 %); followed by 23.63% of the blaCTX-M gene, and 21.81 % encoded the blaSHV gene. 27.27 % of the isolates produced two or three ESBL simultaneously. These results confirmed the high spread of this resistant mechanism among Enterobacteriaceae-producing infections in our public health institutions, therefore control measures should applied to control and reduce its incidence.

Evaluación de métodos fenotípicos para la detección de metalobetalactamasas en aislados clínicos de Pseudomonas aeruginosa / Assessment of Phenotypic Methods for Metalobetalactamase Detection in Clinical Isolates of Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa es considerado uno de los patógenos nosocomiales más importantes, siendo común su aislamiento en pacientes de unidades de cuidados intensivos, en quienes además suele presentar multirresistencia, esto limita enormemente las opciones terapéuticas para el tratamiento del paciente, lo que constituye un problema ya que no se disponen de drogas efectivas para el tratamiento. El presente trabajo tiene como objetivo evaluar cuatro métodos fenotípicos para la detección de metalo-beta-lactamasas (método de sinergia del doble disco con EDTA, método del disco combinado de imipenem y meropenem con EDTA, método de E-Test-MBL y el método de Hodge modificado), con un método de referencia (PCR), para determinar el método fenotípico o combinación de estos que sea más valido y seguro para su implementación en los laboratorios de bacteriología de rutina. La sensibilidad y especificidad de los métodos fenotípicos empleados fue buena (más de 90%), de los métodos empleados, el test de Hodge modificado fue el que proporcionó mejores resultados en la detección de aislados de P. aeruginosa productores de MBL (menor tasa de falsos positivos y negativos), al analizar los diferentes métodos combinados para determinar cuál es la asociación con mayor sensibilidad y especificidad, el método del doble disco asociado con el test de Hodge modificado reunieron estas características, estos resultados sugieren que estos dos métodos se deben emplear de rutina en un laboratorio de Bacteriología, por ser fáciles de realizar, económicos, sensibles y específicos.

Pseudomonas aeruginosa is considered one of the most important nosocomial pathogens. Its isolation is commonin intensive care unit patients who also usually have multi-resistance. This greatly limits therapeutic options, since no effective drugs are available for treatment. The study aims to evaluate four phenotypic methods for detecting metallo-beta-lactamases. The double disc synergy with EDTA method, combined imipenem and meropenem disk with EDTA method, the E-Test-MBL method and the modified Hodge method, along with a reference method (PCR), are used to determine the phenotypic method or a combination of these is used that is more valid and safe for implementation in routine bacteriology laboratories. The sensitivity and specificity of the phenotypic methods used was good (over 90%); the modified Hodge test obtained the best results in detecting MBL-producing P. aeruginosa isolates (lower rate of false positive and negative). On analyzing the different combined methods for determining the association with greater sensitivity and specificity, the double disc method associated with the modified Hodge test met these characteristics. Results suggest that these two methods should be routinely used in a bacteriology laboratory, since they are easy to perform, sensitive, specific and economical.

Detección fenotípica de metalobetalactamasas en aislados clínicos de Pseudomonas aeruginosa / Phenotypic detection of metallo-beta-lactamase in clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa, es considerado uno de los más importantes gérmenes hospitalarios, siendo común su aislamiento en pacientes hospitalizados, adicionalmente, este microorganismo presenta una marcada multiresistencia, lo que incrementa la mortalidad. El tratamiento de estos pacientes suele ser difícil, ya que además de su resistencia natural, Pseudomonas puede adquirir mecanismos de resistencia para prácticamente la totalidad de los antimicrobianos disponibles para su tratamiento, por lo que cada vez es más frecuente y necesario el empleo de antibióticos como los carbapenems, lo que facilita la adquisición de mecanismos de resistencia a estas drogas. El presente estudio intenta determinar la producción de metalobetalactamasas (MBL) en aislados clínicos de Pseudomonas aeruginosa, utilizando para ello dos métodos fenotípicos. Se utilizó el método del doble disco (MDD) y el test de Hodge modificado (MHT). Se analizaron 726 aislados clínicos de P. aeruginosa, el 20,11% (146) de estos fueron resistentes a imipenem (IPM) y meropenem (MEM), por lo que se les realizaron los dos métodos fenotípicos, de los 146 aislados resistentes a carbapenems, 139 fueron positivas para el MDD, mientras que 144 lo fueron para el MHT, estos dos métodos permitieron confirmar la presencia de una carbapenemasa tipo MBL en el 98,63% de los aislados de P. aeruginosa, por otra parte, cinco aislados no fueron positivos para el MDD pero si para el MHT, lo que indicaría la presencia de carbapenemasas no MBL en estos aislado, también se obtienen 2 aislados que a pesar de ser IPM y MEM resistentes fueron negativos por los dos métodos fenotípicos utilizados, esto indicaría la presencia de un mecanismo de resistencia no enzimático que confiere resistencia a carbapenems...

Pseudomonas aeruginosa is considered one of the most important hospital germs; its isolation is common in hospitalized patients. In addition, this microorganism has a marked multi-resistance, which increases mortality. Treatment of these patients is often difficult, since in addition to its natural resistance, Pseudomonas can obtain resistance mechanisms to virtually all antimicrobial drugs available for its treatment; due to this, its appearance is increasingly frequent and necessitates the use of antibiotics such as carbapenems, which facilitates the acquisition of resistance mechanisms to these drugs. This study attempts to determine the production of metallo-beta-lactamase (MBL) in clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa, utilizing two phenotypic methods: the double disc method (MDD) and the modified Hodge test (MHT). 726 clinical isolates of P. aeruginosa were analyzed; 20.11% (146) of these were resistant to imipenem (IPM) and meropenem (MEM); 139 were positive for the MDD, while 144 were positive for the MHT. These two methods permitted confirming the presence of an MBL-type carbapenemase in 98.63% of P. aeruginosa isolates; five isolates were negative for the MDD but positive for the MHT, indicating the presence of non-MBL-type carbapenemase in these isolates. Also, 2 isolates were obtained that, despite being resistant to IPM and MEM, were negative according to the two phenotypic methods used; this would indicate the presence of a non-enzymatic resistance mechanism conferring resistance to carbapenems. The use of phenotypic methods for detecting MBL in P. aeruginosa isolates is quite an acceptable option for use in routine laboratories where specialized molecular biology tests are not available.